Výskumná otázka
Dá sa zistiť kvalita kravského mlieka využitím rozptylu svetla?
Teoretický úvod

Obr. 1 Teoretický úvod k experimentu
V jednolúčových prístrojoch vkladáme do dráhy svetelného lúča striedavo kyvetu s porovnávacím a meraným roztokom. Na základe porovnania ich rozptylu svetla určíme koncentráciu, alebo riedenie meranej vzorky. Takýmto spôsobom sa eliminujú všetky negatívne vplyvy, ktoré ovplyvňujú rozptyl svetla spôsobený meranou látkou. Porovnávací roztok obsahuje všetky zložky meraného roztoku, okrem meranej látky. Niekedy sa v literatúre označuje ako "blank" alebo "slepý roztok".
Rozširujúce informácie pre učiteľa
Mlieko je veľmi významnou potravinou, na ktorej sme hlavne v rannom detstve mimoriadne závislí. To vyjadruje aj názov cicavce (lat. Mammalia), ktoré sú vývojovo pokročilou triedou stavovcov, ktorá sa v súčasnosti vyskytuje takmer všade na Zemi. V súčasnosti je na celom svete zistený výskyt takmer 5500 druhov cicavcov.
Pojem mlieko je veľmi rozšírený a mnohovýznamový, môže to byť kvapalina produkovaná prsnými žľazami samíc cicavcov na výživu mláďat, kvapalina alebo šťava podobná mlieku cicavcov (napr.: kokosové mlieko, pleťové mlieko, kaučukové mlieko, cementové mlieko, vápenné mlieko, sójové mlieko, ryžové mlieko, mandľové mlieko a iné mlieka). Významovo a prenesene môže znamenať biele sfarbenie, belosť. Tiež sa vyskytuje v nárečových názvoch niektorých rastlín - žabacie mlieko (mlieč močiarny), vtáčié mlieko (lastovičník väčší).
Viac o mlieku pozri na https://sk.wikipedia.org/wiki/Mlieko_(cicavce) .

Obr. 2 Základné zloženie 1 litra kravského mlieka (https://mlieko.sk/zlozenie-mlieka/)
Mlieko je veľmi zložitou zmesou látok, z ktorých významnú úlohu pre náš vývoj má mliečna bielkovina – kazeín. Kazeín sa vyskytuje len v mlieku cicavcov. Jeho obsah kolíše medzi 70 – 80 % z celkového počtu bielkovín. V sušine mlieka je ho asi 2,5 – 2,6 %. Je to bielkovina syntetizovaná v sekrečných bunkách mliečnej žľazy. Vytvára zložité útvary - nachádza sa vo forme kazeínových miciel (koloidná fáza – 90 – 95 %) a ako rozpustný ( molekulárna fáza – 5 – 10 %). Micely sú útvary, ktoré vznikajú vo vodnej fáze mlieka ako dôsledok prítomnosti tukových kvapôčok, ktoré sa neznášajú s vodou (sú hydrofóbne, po grécky je hydor voda a fobein znamená báť sa) a nevedia sa v nej rozpustiť na pravý roztok. Micely v mlieku a ich agregáty vnímame ako biele, pretože majú veľkosť väčšiu (rádovo mikrometre, 10-6 metra) ako je vlnová dĺžka červeného svetla (cca 600-700 nm; 0,7 mikrometra) a odrážajú do naších očí všetky fotóny denného svetla (od 400 nm po 750 nm). Pri dostatku Ca prevládajú micely. Ďalším faktorom je teplota. Pod 5 °C (2 – 3 dni) prechádzajú micely na rozpustný kazeín. Nad 70 °C pribúda rozpustný kazeín (vzniká nerozpustný Ca). Pri dlhodobom skladovaní sa uvoľňuje β-kazeín (50 %). Degraduje na γ-kazeín a ten degraduje proteózo–peptónovú frakciu. Veľkosť miciel 80 – 300 nm. Pri ovčom 80 nm. Micely sa skladajú zo submiciel, ktorých je od 300 do 500. Tieto sú pospájané iónmi Ca2+, Mg2+, HPO42- ,citrátovými, v malom množstve aj Na+, K+, Mn2+.
Na povrchu submiciel je nerozpustný Ca3(PO4)2 a tiež zabudovaný ϰ-kazeín. Medzi micelami sa nachádza kapilárna voda. Vodu viažu cukry ϰ – kazeínu a bielkoviny (aminokyseliny COO-). Všetky vlastnosti sa odvíjajú od existencie hydratačného obalu. Micely majú na povrchu hydratačný obal, ktorý je tým väčší, čím má micela väčší náboj. V izoelektrickom bode má vody najmenej a rozpustnosť a stabilita micely je najnižšia. Hydratačný obal sa zmenšuje teplom, sólami (vysoľovanie), dobre rozpustnými látkami vo vode (alkohol), blokovaním polárnych skupín ťažkými kovmi alebo hydrokoloidmi.
Kazeín v čerstvom mlieku sa vyznačuje veľkou termostabilitou, zráža sa pri teplote 150 0C za niekoľko sekúnd a varom po niekoľkých hodinách. Zráža sa syridlom, kyselinami, niektorými soľami (CaCl2, nasýteným roztokom síranu horečnatého alebo amónneho, soľami ťažkých kovov atď.) https://vsetkomlieko.webnode.sk/news/kazein-v-mlieku-zlozenie-mlieka-/.
Pomôcky a materiály
Laboratórne pomôcky a materiály:
- 4x 25 ml kadička
- 4 pipety
- plastové kyvety
- sklená tyčinka
- 3x odmerné valce
- destilovaná voda
- laboratórny plášť
- Mlieko (nízkotičné, polotučné, plnotučné alebo nadojené od chovateľa kráv)
- Jednorázové rukavice
Digitálne pomôcky:
- PASCO kolorimeter a turbidimeter
- tablet, iPad, mobil
- Softvér Sparkvue (Pasco)
- Softvér Word Microsoft Office 365
Bezpečnosť
Experiment/bádanie je z hľadiska bezpečnosti nenáročný, študenti pracujú s mliekom, s destilovanou vodou.
Príprava techniky na experimentovanie
Pred vyučovacou hodinou učiteľ pripraví:
- Tablety (nabije) a nahrá do nich iPL (e-protokoly).
- Pasco kolorimeter a turbidimeter
- Všetky potrebné laboratórne pomôcky
- Dôkladne si naštuduje prácu v softvéri SPARKvue a s Pasco kolorimetrom a turbidometrom, alebo zadajte aj žiakom si naštudovať hlavne kalibráciu senzora pre meranie turbidity roztokov https://www.youtube.com/watch?v=V_v8gfSCFTU
Dôležité! Kyvety pri meraní turbidity roztokov sa používajú priehľadné zo všetkých strán. Chytajte ich iba za vrchný uzáver, svetelný lúč musí prechádzať čírou časťou zľava doprava ako je to naznačené na vrchnej doske prístroja, ale aj zhora nadol. Pred každým meraním je potrebné poriadne utrieť kyvetu papierom a potom ju vložte do senzora.
Pracovný postup pre prípravu vzoriek na experimentálne meranie
Zapnite wireless senzor kolorimeter a turbidimeter.
Zo zásobníka destilovanej vody odpipetujeme 10 mililitrov (cm3 ) do kadičky alebo liekovnice objemu 25 cm3. Z nej prelejeme vzorku do plastovej kyvety a odmeriame turbiditu. Turbidita destilovanej vody by mala byť 0,0 NTU.
Do ďalšej plastovej kyvety nalejte štandardný roztok s hodnotou turbidity 100 NTU, (ktorý je súčasťou prístroja), odmerajte turbiditu a tým je nakalibrovaný prístroj na správne meranie.
Do čistej kadičky odlejeme 10 ml mlieka, prelejeme do kyvety a meriame hodnotu turbidity v plastovej meracej kyvete tak, aby mlieko vyplnilo priestor do výšky minimálne 25 mm, ktorá zabezpečí správne meranie.
Do druhej kadičky odlejeme 10 ml mlieka, zriedime na polovinu (destilovanou vodou), prelejeme do kyvety a meriame hodnotu turbidity v plastovej meracej kyvete tak, aby zriedené mlieko vyplnilo priestor do výšky minimálne 25 mm, ktorá zabezpečí správne meranie.
Do 3 kadičky prelejeme z 2 kadičky 10 ml už zriedeného mlieka a zriedime ho opäť na polovicu a opäť odmeriame turbiditu roztoku mlieka. Tento postup opakujem až dovtedy pokiaľ nedostaneme hodnotu turbidity zriedeného roztoku mlieka približnú, alebo zhodnú s jej hodnotou nameranou pre destilovanú vodu.

Obr. 3 Príprava roztokov mlieka pre meranie ich turbidity
Dôležité je si uvedomiť, že pri nakalibrovaní prístroja pracuje prístroj v oblasti hodnôt 0 až 100 NTU. Preto pri meraní vzoriek riedených na polovicu, štvrtinu, osminu dostávame hodnotu turbidity oveľla vyššie ako je 100 NTU. Tu si musia študenti uvedomiť, že meriame mimo oblasti citlivosti prístroja a teda ak sa chceme dostať do oblasti nakalibrovanej na meranie turbidity vzoriek 0 – 100 NTU, riedenie mlieka destilovanou vodou musí byť oveľa väčšie a to musíme začať 10 ml mlieka zriediť s destilovanou vodou v pomere 1/160, potom ďalšie vzorky z prvej nariedenej vzorky riediť na polovicu a tak postupne nameriame turbidity roztokov v oblasti 0-100 NTU.
Zostrojte kalibračnú závislosť ako vzťah Turbidita = funkcia (zrieďovací faktor), pričom zrieďovací faktor bude mať hodnotu 1 pre nezriedené mlieko; 0,5 pre mlieko zriedené na polovinu; 0,25 pre pôvodné mlieko zriedené na jednu štvrtinu a tak ďalej.
Zostrojenú kalibračnú závislosť použite na zistenie neznámeho zrieďovacieho faktora vo vzorke mlieka s neznámym riedením.
Aplikujte tento postup na mlieko s rôznym obsahom tukov a diskutujte aká matematická funkcia najlepšie popisuje nameranú závislosť, ako vypočítame výsledok pomocou rovnice funkcie a podobne.
Experiment
Úlohy pre študentov

Obr. 4 e-protokol - úlohy pre študentov
Meranie
Meranie pomocou Pasco kolorimetra a turbidimetra a softvéru Sparkvue

Obr. 5 Meranie turbidity roztokov mlieka v závislosti od ich zrieďovacieho pomeru
Analýza získaných výsledkov
Študenti majú v e-protokole pripravenú stranu kde majú zhodnotiť celý experiment a vyvodiť záver zo svojej bádateľskej práce.
Ukladanie e-Protokolu
Spôsob ako uložiť svoj iProtokol majú študenti k dispozícii na poslednej snímke (obrázok 11).
Formatívne sebahodnotenie
Nakoniec, majú študenti priestor pre sebahodnotenie (Obrázok ) – kde vyhodnotia, či správne riešili tri zadané úlohy. Formulujú výstižne svoj kognitívny proces, čo im robilo problémy, čo sa naučili, aké zručnosti nadobudli atď.
Diskusia
Odporúčané témy pre ďalšie experimenty:
- Zistite aké sú hodnoty turbidity rôznych druhov mlieka tak že použijete rovnaké zrieďovacie pomery.
- Zistite aká je kvalita vody, ktorú pijeme. Z vodovodu doma, v škole, zo studne, z obchodu a vyvoďte závery.
Študenti, môžu samostatne navrhnúť ďalšie zaujímavé experimenty pre využitie senzora kolorimentra a turbidimetra.
Literatúra
Labuda J., a kolektív: Analytická chémia, ALFA/SNTL, Bratislava 2019.
https://pasco.com
https://vsetkomlieko.webnode.sk/news/kazein-v-mlieku-zlozenie-mlieka-/
https://www.youtube.com/watch?v=V_v8gfSCFTU